肝細胞培養(yǎng)試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/酶標抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。
今天小編要與大家分享的是肝細胞培養(yǎng)試劑盒的操作步驟：
1、標本的采集及保存：
（1）血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃經(jīng)過一夜夜后于1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
（2）血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000xg離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
（3）細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
（4）樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋10，000倍。
2、試劑的準備：
按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑，胰島素elisa試劑盒中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的，自配的緩沖液應(yīng)用pH計測量較正，從冰箱中取出的試驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。
3、加樣：
分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
4、溫育：
用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
5、洗滌：
小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6、顯色：
每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
7、測定：
以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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更新時間：2023-01-03
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